【集萃网观察】说起钙离子染料，你可能首先想到Fluo-3、Fluo-4，但其实，除了这两种最常用的，还有别的。AAT Bioquest旗下著名的荧光染料就有数十种。 

    细胞内钙离子的增加控制了多种细胞进程。而多个胞内来源和质膜Ca2+渗透通道参与了钙离子浓度的改变。此外，检测或缓冲这些改变的内源蛋白和细胞器对钙离子有着不同的亲和力。因此，钙离子水平变化的量和持续时间相差甚远，这样就需要多种检测试剂，来观察这些改变。最适合成像实验的钙离子染料取决于您所开展的应用和钙离子浓度改变的性质。   

    选择时首先要注意，让染料亲和力与钙离子水平的预计增幅匹配。打个比方，如果用高亲和力染料来检测钙离子的大幅增加，那么染料可能会变得饱和，导致变化幅度测得不准确。相反，亲和力低的染料也不能用来检测钙离子的低水平变化。   

    此外，在选择特定成像应用的染料时，染料的发射强度也是必须要考虑的。Fluo染料家族在静止时有着极低的发射，而结合钙离子后发射强度会大幅增加，这样就很难分辨静止的细胞。Oregon Green® 488 BAPTA染料家族成员有着较高的静止荧光，因此能用来定位细胞和结构，但与钙离子结合后的发射强度最大变化较低。 

    高亲和力染料如Fluo-4、Fluo-3和Oregon Green® 488 BAPTA-1及BAPTA-2最适合检测低强度刺激的反应，其中利用了少量质膜或细胞内钙离子通道。而中等强度的细胞刺激，如长时间利用多个通道，则最好用中等亲和力的染料如Fluo-5F来检测。至于高强度刺激，Oregon Green® 488 BAPTA-5N和Fluo-4FF等低亲和力染料则最适合。   

    对于多重检测，您可以选择红色的钙离子染料，这样与GFP等绿色荧光就不冲突。红色染料中有高亲和力的Rhod-3和X-Rhod-1以及低亲和力X-Rhod-5F可供选择。荧光钙离子指示剂的乙酰甲酯（AM）衍生物是最常用的活细胞染料形式。AM衍生物能够穿过质膜，随后内源的酯酶切割AM基团，让带电荷的分子困在细胞内。对于单细胞成像，不通透的染料形式可通过注射或透析上样。

    百萤生物为科研一线的工作者提供了一种新型的更为有效的钙流检测试剂盒—免洗型Fluo-8钙流检测试剂盒。与其他钙流检测试剂盒相比，该试剂盒更为灵敏和方便，更加适合于高通量药物筛选。试剂盒内所用的Fluo-8是目前最敏感的钙离子指示剂，其强度是Fluo-4的2倍，Fluo-3的4倍。使用该试剂盒进行钙流检测时，可以直接在室温下进行细胞与染料混合液的孵育，无需洗涤，就可以用读板机进行检测，进而使得钙流检测实验成为一种简单的“混合-测量”的过程，从而向大家提供了一种更为快速、简单、可靠的测定细胞内钙离子浓度变化的方法。

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